EMSA凝膠遷移阻滯實驗

一、技術(shù)簡介

EMSA技術(shù)即凝膠遷移或電泳遷移率實驗，用于研究DNA/RNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA/RNA結(jié)合序列相互作用的技術(shù)；

二、技術(shù)原理

將純化的蛋白或細胞粗提液與標記的DNA或RNA探針一同孵育，在非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中，DNA-蛋白或RNA-蛋白復(fù)合物的遷移率比未結(jié)合的探針慢，從而檢測到活化的與DNA或RNA結(jié)合的蛋白轉(zhuǎn)錄或調(diào)節(jié)因子。

三、應(yīng)用場景

1.基因表達調(diào)控研究：確定轉(zhuǎn)錄因子與DNA的結(jié)合位點和結(jié)合特性，研究基因表達的調(diào)控機制。

2.疾病機理研究：分析疾病相關(guān)基因的表達調(diào)控異常，探索疾病的發(fā)生發(fā)展機制。

3.藥物靶點發(fā)現(xiàn)：篩選和鑒定與疾病相關(guān)的DNA結(jié)合蛋白，為藥物研發(fā)提供靶點。

4.信號通路研究：研究信號通路中DNA結(jié)合蛋白的活性變化及其對下游基因的影響。

四、技術(shù)優(yōu)勢

1.實驗操作相對簡單，對實驗條件要求不苛刻。

2.可檢測多種核酸分子大小和結(jié)構(gòu)以及廣泛的蛋白大小范圍，能在單個反應(yīng)體系中檢測不同蛋白與不同核酸分子的結(jié)合情況。

3.生物素標記探針穩(wěn)定、安全、準確且親和力高。

五、樣本類型

新鮮細胞（貼壁細胞/懸浮細胞）、凍存細胞、凍存組織、細胞核蛋白樣本或純化的轉(zhuǎn)錄因子，部分實驗亦可使用重組表達的蛋白。

六、樣本需求

細胞樣本：約1×10^7個（可以是1個10cm皿，或以懸浮細胞形式存儲于離心管中，或1個T75瓶）；

凍存組織：約400mg；

植物組織：約2g；細胞核蛋白、純化轉(zhuǎn)錄因子、重組表達蛋白等：每張膜至少提供50ul，濃度不低于0.5mg/ml。

七、樣本準備&運輸

活細胞樣本：距離較近的可以將養(yǎng)在皿/T75瓶/離心管內(nèi)的新鮮細胞樣本常溫快遞（最遲次日達）運輸，本市內(nèi)可閃送或親自遞送，距離較遠的，可-80℃凍存細胞干冰運輸；

組織樣本&其他液體樣本：-80℃凍存干冰運輸。

八、需提供的試劑

結(jié)合蛋白特異性抗體50ul以上，濃度大于0.5mg/ml。

九、實驗周期

2-3周

十、其他

探針序列，如無探針序列，請?zhí)峁〥NA結(jié)合蛋白相關(guān)信息或相關(guān)文獻。